30.10.2007

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВИЧ-ИНФЕКЦИИ

Введение

Лабораторные исследования по диагностике ВИЧ-инфекции осуществляются по четырем основным направлениям:

· Постановка диагноза;

· Тестирование донорской крови;

· Эпидемиологическое слежение за ВИЧ-инфекцией;

· Назначение лечения и мониторинг его эффективности.

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

СПЕЦИФИЧЕСКИЕ

3. Иммуноферментный анализ (ИФА) используется для выявления антител (иногда в сочетании с антигеном P24) в сыворотке или плазме крови. Принцип основан на выявлении комплекса антигена ВИЧ, иммобилизированного на твердой фазе планшета, со специфическими антителами в исследуемом образце. Последующее внесение реагентов приводит к изменению окрашивания раствора в лунке, измеряемого инструментально. Требуется использование специально подготовленного персонала и лабораторного оборудования, позволяющего осуществлять постановку и учет ИФА в соответствии с Инструкцией по применению тест-систем, разрешенных для практики.

На сегодняшний день для постановки ИФА существуют 4 поколения тест- систем:

• Первое поколение тест-систем базируется на использовании очищенного лизата ВИЧ-1 в качестве антигена, наносимого на твердую фазу планшет. Тест-системы предназначены для выявления специфических иммуноглобулинов класса G. Чувствительность и специфичность не более 95%. Антитела определяются начиная с 27 дня с момента заражения ВИЧ.

• Второе поколение тест-систем основано на использовании рекомбинантных белков или синтетических пептидов ВИЧ -1 и ВИЧ-2 в качестве антигена, наносимого на твердую фазу планшет. Тест-системы предназначены для выявления специфических иммуноглобулинов класса G. Чувствительность не более 95%, но специфичность выше 95%. Антитела определяются начиная с 27 дня с момента заражения ВИЧ.

• Третье поколение тест-систем основано на использовании рекомбинантных белков и/или пептидов ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в качестве антигена, наносимого на твердую фазу планшет. Тест-системы предназначены для выявления не только специфических иммуноглобулинов класса G, но и класса М. Чувствительность и специфичность выше 97%. Антитела определяются, начиная с 21 дня с момента заражения ВИЧ.

• Четвертое поколение тест-систем направлено на выявление не только антител к ВИЧ, но и антигена ВИЧ-р24. Это обеспечивает не только чувствительность и специфичность выше 97%, но и более раннюю диагностику ВИЧ-инфекции начиная с 12 дня после заражения ВИЧ.

ИФА – тесты используются для скрининга сыворотки или плазмы при постановке диагноза ВИЧ-инфекции, для тестирования донорской крови, эпидемиологическом слежении за ВИЧ-инфекцией. Необходимо помнить, что любое поколение тест-систем ИФА может давать как ложноотрицательные, так и ложноположительные результаты.

• Ложноотрицательные результаты могут возникать при так называемом «серологическом окне», т.е. отсутствием в начальном периоде заболевания в организме ВИЧ-инфицированного специфических антител. Кроме того, отсутствие специфических антител может быть вызвано особенностями соматического статуса ВИЧ-инфицированного (агаммаглобулинемией, серореверсией, конечной стадией ВИЧ-инфекции – СПИД).

• Ложноположительные результаты могут наблюдаться при соматических заболеваниях, связанных с поражением иммунной системы (аутоиммунные расстройства, различные онкологические заболевания, инфекционные заболевания, вызванные вирусными и бактериальными инфекциями), а также при беременности.

2. Экспресс (быстрые) тесты применяются для выявления антител к ВИЧ в слюне, крови, сыворотке и плазме крови. По технологии их изготовления различают аглютинационные, иммунофильтрационные (проточные) иммунохроматографические ( с использованием латеральной хроматографии) и точечно-хроматографические тесты. По своей чувствительности и специфичности они соответствуют ИФА – тестам 3 поколения. Для быстрых тестов не требуется измерительное оборудование, так как результаты оцениваются визуально; не требуется длительное обучение персонала. Время их проведения значительно меньше, чем ИФА. Быстрые тесты могут применяться в лабораториях, не оснащенных специальным оборудованием.

3.Иммуноблот (вестерн-блот)основан на выявлении специфических антител к различным белкам ВИЧ. Его высокая специфичность по сравнению с другими методами основана на раздельном выявлении антител к различным белкам ВИЧ. Иммуноблот используется для подтверждения положительных результатов скринирования и осуществляется в лаборатории РЦ СПИД. Требуется специально подготовленный персонал и лабораторное оборудование, также тест-система, зарегистрированная в стране. Постановку реакции и учет полученных результатов осуществляют строго в соответствии с тест-системой.

4. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

ПЦР - это высокочувствительная реакция, при которой происходит амплификация (селективное умножение) специфических последовательностей ДНК до такого уровня, когда их можно определить методом электрофореза или другими методами. ПЦР используется для выявления провирусной ДНК ВИЧ в крови (при качественном анализе) или геномной РНК ВИЧ в плазме крови (при количественном анализе, т.е. для определения «вирусной нагрузки»). Требуется специально подготовленный персонал и лабораторное оборудование, а также соответствующие тест-системы, зарегистрированные в стране.

НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

5. Определение количества CD-4-лимфоцитовявляется неспецифическим методом определения состояния иммунного статуса. CD4-лимфоциты представляют собой субпопуляцию Т-лимфоцитов (Т-хелперов), количество которых в норме составляет от 500 до 1500 в 1 мкл крови в зависимости от возраста. Снижение количества Т-хелперов (СД4) является главным прогностическим показателем Т-клеточного иммунодефицита при ВИЧ-инфекции, которое проявляется уже бессимптомной стадии и сохраняется в течение всего заболевания. Определение уровня CD4 лимфоцитов в образцах крови проводят с помощью моноклональных антител на проточном цитофлюориметре. Требуется специально подготовленный персонал и лабораторное оборудование, а также соответствующие тест-системы, зарегистрированные в стране.

Стратегия тестирования в соответствии с рекомендациями ВОЗ, ЮНЭЙДС, CDC(WHO/CDS/CSR/EDC/2001.16, UNAIDS/01.22E)

Стратегия 1 - одно тестирование без подтверждения положительного результата применяется:

· Для тестирования крови доноров;

· Постановке диагноза с распространенностью ВИЧ-инфекции более 30% инфекции среди населения с клиническими симптомами и проявлениями ВИЧ-инфекции;

· Для эпидемиологического слежения в популяциях, с распространенностью ВИЧ-инфекции более 10%.

Стратегия 2 - (одно тестирование с одним подтверждением положительного результата), применяется при:

· Постановке диагноза с распространенностью ВИЧ-инфекции не более 30% инфекции среди населения с клиническими проявлениями или симптомами ВИЧ-инфекции или среди популяции с распространенностью ВИЧ-инфекции более 10% с асимптоматическими проявлениями инфекции;

· Для эпидемиологического слежения в популяциях, с распространенностью ВИЧ-инфекции менее 10%.

Стратегия 3 - (одно тестирование с двумя подтверждениями положительного результата) применяется при:

· Постановке диагноза ВИЧ-инфекции среди популяции с распространенностью ВИЧ-инфекции менее или равно 10% без симптоматических проявлений.

Стр. 2 - 2 из 11
Начало | Пред. | 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 | След. | Конец | Все