Приложение №1 "Методические рекомендации "Этиология, эпидемиология и диагностика ВИЧ-инфекции"

Приложение №1

Методические рекомендации «Этиология, эпидемиология и диагностика ВИЧ-инфекции»

Самые первые случаи новой инфекции были зарегистрированы Центром по контролю за заболеваниями США (CDC) в 1981 году среди молодых гомосексуалистов, заболевших пневмоцистной пневмонией или саркомой Капоши. У большинства из них был обнаружен Т – клеточный иммунодефицит, вызванный вирусом иммунодефицита человека - ВИЧ. Впервые ВИЧ-инфекция была описана в своей финальной ста­дии, получившей позднее название «Синдром Приобретенного Им­мунного Дефицита» (СПИД). Предположение об инфекционной природе заболевания было высказано уже в июне 1982 г.

В дальнейшем выяснилось, что случаи СПИДа обнаружены у наркоманов, вводящих наркотики внутривенно, проституток; людей, страдающих гемофилией и получающих заместительную терапию препаратами, полученными из крови доноров; лиц, получивших переливание донорской крови; детей, рожденных от матерей из какой-либо группы риска; сексуальных партнеров, больных СПИДом.

ЭТИОЛОГИЯ

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) относят к подсемей­ству лентивирусов (cлово «ленти» означает замедленный, длительный) семейства ретровирусов. Характерными осо­бенностями ретровирусов являются уникальное строение генома и наличие фермента - обратной транскриптазы (РНК-зависимая ДНК-полимераза). Присутствие обратной транскриптазы или ревертазы в структуре вируса обеспечи­вает обратную направленность потока генетической информации: не от ДНК к РНК, а, наоборот, от РНК к ДНК.

ВИЧ - облигатный внутриклеточный микроорганизм. Эксперимен­тально доказано, что введенная в кровоток живая культура ВИЧ, не способная проникнуть в клетки, погибает за 15 мин. Его репликация (воспроизведение) происходит строго внутри клеток хозяина. Процесс этот начинается с «узнава­ния» вирионом (внеклеточной формой вируса) клетки-ми­шени и проникновения в нее. Маркером клетки-мишени, который позволяет вириону «узнавать» и находить такую клетку, является расположенный на ее поверхности рецеп­тор СD4. Воспроизводство ВИЧ связано только с определенными клет­ками. Считается, что вирус способен активно проникать в клетки, на поверхности которых находится рецептор СD4, с которым он взаимодействует. Этот рецептор несут в основном клетки, цирку­лирующие в крови, лимфе и тканевой жидкости, а также относящи­еся к неспецифическим элементам нервной ткани. Однако досто­верными методами факт активной репродукции ВИЧ выявлен лишь в лимфоцитах и некоторых клетках макрофагально-моноцитарного ряда, что свидетельствует об обязательном участии этих клеток в развитии инфекционного процесса. Полный жизненный цикл вируса реализуется довольно быстро, всего за 1-2 сут; в день формируется до 1 млрд вирусных частиц, поэтому за длительный период в организме мо­жет накапливаться значительное количество мутантных вариантов ВИЧ.

В результате изменчивости могут возникать штаммы, различа­ющиеся по многим характеристикам, в том числе по устойчивости и восприимчивости к различным противоретровирусным агентам.

В 1986 г. французскими учёными в западных регионах Африки выявлен ещё один патогенный для человека ретровирус, который вызывал поражение Т-лимфоцитов. Было предложено назвать его ВИЧ-2. Установлено, что он является самостоятельным вирусом, вызывающим СПИД. Он, в основном, обнаруживется у жителей стран Западной Африки, является менее патогенным и менее контагиозным.

Причиной развития СПИДа, в основном, является более патогенный и контагиозный ВИЧ-1.

ЭПИДЕМИОЛОГИЯ

ВИЧ-инфекция, с эпидемиологической точки зрения, входит в категорию особо опасных инфекций и считается антропонозным заболеванием. Источником инфекции является носитель вируса иммунодефицита человека.

Вирусоносительство может длиться от 3 месяцев до 10 лет и более. В организме инфицированного человека ВИЧ обнаруживается в наибольшем количестве в крови, цереброспинальной жидкости, лимфоидной ткани, головном мозге, сперме, влагалищном секрете, менструальной крови, грудном молоке, и в меньших концентрациях – в слезной жидкости, слюне, секрете потовых желез. По степени риска заражения биологические жидкости распределяются следующим образом: самую большую опасность имеет ВИЧ-инфицированная кровь (для заражения достаточно 0,1мл инфицированной крови), далее идут – сперма, вагинальный секрет, спинномозговая жидкость. Такие биологические жидкости, как пот, слюна, моча, слезная жидкость, а также фекалии содержат настолько мало вируса, что заражение от них маловероятно. Нагре­вание до 56° вызывает его инактивацию через 30 мин, до 70° - через 10 мин; при кипячении вирус погибает через 1-2 мин. Обычные дезинфицирующие растворы, такие как 3% раствор перекиси водорода, 5%раствор лизола, 0,2% гипохлорита натрия, 1% раствор глютарового альдегида, 70% этанол, эфир, ацетон, уничтожают вирус во внешней среде. Вместе с тем, ВИЧ устойчив к воз­действии ультрафиолетовых лучей и ионизирующей радиа­ции, сохраняется в высушенном виде 4-6 дней при температуре 22⁰С, в донорской крови сохраняется годами, хорошо пере­носит низкие температуры.

Механизм передачи

Механизм передачи ВИЧ-инфекции – контактный. ВИЧ-инфекция передается естественными и искусственными путями. К настоящему времени доказано существование трех путей передачи вируса иммунодефицита человека:

1. При половых контактах – естественный путь

2. Вертикальный - от матери к плоду или ребенку – естественный путь

3. Парентеральный – при переливании крови от ВИЧ-инфицированного лица, использовании препаратов крови, при трансплантации тканей или органов, а также при совместном использовании одних и тех же шприцев и игл для инъекций без предварительной стерилизации – искусственный путь.

Половой путь передачи инфекции реализуется при гетеро- (мужчина и женщина) и гомо- (мужчины, имеющие секс с мужчинами) сексуальных контактах.

Вертикальный путь – передача от ВИЧ-инфицированной матери к плоду во время беременности, родов и ребенку при кормлении грудным молоком. Реализуется как с помощью трансплацентарной передачи (во время беременности), так и интранатального механизма (во время родов), а также постнатально – во время грудного вскармливания.

Парентеральный путь – при переливании крови и её компонентов, пересадке органов и тканей, в результате использования инфицированных игл, шприцев, нестерильных медицинских инструментов. Парентеральный путь инфицирования реализуется также среди потребителей инъекционных наркотиков, вводящих наркотики внутривенно. Факторами передачи при этом могут быть как необеззараженные общие шприцы и иглы, так и сам наркотик, в который добавляется кровь с целью его «очистки».

Не исключается возможность передачи вируса в быту через инфицированные бритвенные приборы, и другие колюще-режущие предметы. При бытовых контактах вирус может быть передан также через предметы личной гигиены, загрязненные остатками крови (зубная щетка, лезвия для бритья, колющие и острые режущие приборы при процедурах с нарушением целостности кожных покровов). В тоже время заражение невозможно через общую посуду; при плавании в бассейне, пользовании туалетом и т.п.

Передача вируса ВИЧ-инфекции через укусы кровососущих насекомых (вши, блохи, комары) не доказана.

Вероятность передачи ВИЧ-инфекции высока при однократном контакте с нестерильными многоразовыми инструментами для манипуляций. Заражение реципиента при переливании ВИЧ – инфицированной крови составляет 90 %. При половом контакте вероятность передачи ВИЧ существенно ниже.

Инфицирование в лечебных учреждениях возможно при переливании зараженной крови, ее препаратов, повторном использовании загрязненных кровью медицинских инструментов (шприцев, внутрисосудистых катетеров, гинекологических зеркал, боров, эндоскопов, хирургических и других инструментов), не прошедших соответствующую обработку.

С целью предупреждения внутрибольничной передачи ВИЧ-инфекции необходимо каждого обратившегося за медицинской помощью рассматривать, как потенциального носителя вируса иммунодефицита человека. Использовать шприцы, иглы, системы, инструментарий одноразового пользования. Строго соблюдать правила дезинфекции, предстерилизационной очистки и стерилизации медицинского и лабораторного инструментария многоразового пользования. При оказании всех видов медицинской помощи необходимо строго соблюдать меры предосторожности.

Каждый медицинский работник ЛПУ при оказании медицинской помощи больным должен помнить об опасности заражения ВИЧ. В каждом отделении стационара медицинские инструменты должны обеззараживаться, проводиться очистка перед стерилизацией. Медицинские работники должны соблюдать правила дезинфекции и стерилизации, чтобы не заразиться вирусом. На рабочем месте медицинских работников должны быть выписки из директивных документов, указаний, методических руководств МЗ РУз. При проведении медицинской манипуляции во избежание заражения ВИЧ-инфекцией необходимо соблюдать осторожность, все манипуляции должны проводиться обязательно в резиновых перчатках, специальной защитной одежде (халат, маска 4-5 слойная, при необходимости защитные очки). Острые режущие и колющие инструменты по мере возможности использовать меньше.

Для предупреждения попадания крови больного на кожу, слизистые оболочки и поврежденные участки необходимо соблюдать следующие правила:

- Поврежденные участки кожи персонала (ссадины, трещины, порезы, потертости) закрыть лейкопластырем;

- Надевать защитные очки, маску, если предполагается разбрызгивание крови или жидких сред организма, а также при манипуляциях с образцами крови и сыворотки;

- До отправки в лабораторию образцы крови и жидких сред организма должны помещаться в контейнеры или в биксы с надежными крышками.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВИЧ-ИНФЕКЦИИ

Введение

Лабораторные исследования по диагностике ВИЧ-инфекции осуществляются по четырем основным направлениям:

· Постановка диагноза;

· Тестирование донорской крови;

· Эпидемиологическое слежение за ВИЧ-инфекцией;

· Назначение лечения и мониторинг его эффективности.

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

СПЕЦИФИЧЕСКИЕ

3. Иммуноферментный анализ (ИФА) используется для выявления антител (иногда в сочетании с антигеном P24) в сыворотке или плазме крови. Принцип основан на выявлении комплекса антигена ВИЧ, иммобилизированного на твердой фазе планшета, со специфическими антителами в исследуемом образце. Последующее внесение реагентов приводит к изменению окрашивания раствора в лунке, измеряемого инструментально. Требуется использование специально подготовленного персонала и лабораторного оборудования, позволяющего осуществлять постановку и учет ИФА в соответствии с Инструкцией по применению тест-систем, разрешенных для практики.

На сегодняшний день для постановки ИФА существуют 4 поколения тест- систем:

• Первое поколение тест-систем базируется на использовании очищенного лизата ВИЧ-1 в качестве антигена, наносимого на твердую фазу планшет. Тест-системы предназначены для выявления специфических иммуноглобулинов класса G. Чувствительность и специфичность не более 95%. Антитела определяются начиная с 27 дня с момента заражения ВИЧ.

• Второе поколение тест-систем основано на использовании рекомбинантных белков или синтетических пептидов ВИЧ -1 и ВИЧ-2 в качестве антигена, наносимого на твердую фазу планшет. Тест-системы предназначены для выявления специфических иммуноглобулинов класса G. Чувствительность не более 95%, но специфичность выше 95%. Антитела определяются начиная с 27 дня с момента заражения ВИЧ.

• Третье поколение тест-систем основано на использовании рекомбинантных белков и/или пептидов ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в качестве антигена, наносимого на твердую фазу планшет. Тест-системы предназначены для выявления не только специфических иммуноглобулинов класса G, но и класса М. Чувствительность и специфичность выше 97%. Антитела определяются, начиная с 21 дня с момента заражения ВИЧ.

• Четвертое поколение тест-систем направлено на выявление не только антител к ВИЧ, но и антигена ВИЧ-р24. Это обеспечивает не только чувствительность и специфичность выше 97%, но и более раннюю диагностику ВИЧ-инфекции начиная с 12 дня после заражения ВИЧ.

ИФА – тесты используются для скрининга сыворотки или плазмы при постановке диагноза ВИЧ-инфекции, для тестирования донорской крови, эпидемиологическом слежении за ВИЧ-инфекцией. Необходимо помнить, что любое поколение тест-систем ИФА может давать как ложноотрицательные, так и ложноположительные результаты.

• Ложноотрицательные результаты могут возникать при так называемом «серологическом окне», т.е. отсутствием в начальном периоде заболевания в организме ВИЧ-инфицированного специфических антител. Кроме того, отсутствие специфических антител может быть вызвано особенностями соматического статуса ВИЧ-инфицированного (агаммаглобулинемией, серореверсией, конечной стадией ВИЧ-инфекции – СПИД).

• Ложноположительные результаты могут наблюдаться при соматических заболеваниях, связанных с поражением иммунной системы (аутоиммунные расстройства, различные онкологические заболевания, инфекционные заболевания, вызванные вирусными и бактериальными инфекциями), а также при беременности.

2. Экспресс (быстрые) тесты применяются для выявления антител к ВИЧ в слюне, крови, сыворотке и плазме крови. По технологии их изготовления различают аглютинационные, иммунофильтрационные (проточные) иммунохроматографические ( с использованием латеральной хроматографии) и точечно-хроматографические тесты. По своей чувствительности и специфичности они соответствуют ИФА – тестам 3 поколения. Для быстрых тестов не требуется измерительное оборудование, так как результаты оцениваются визуально; не требуется длительное обучение персонала. Время их проведения значительно меньше, чем ИФА. Быстрые тесты могут применяться в лабораториях, не оснащенных специальным оборудованием.

3.Иммуноблот (вестерн-блот)основан на выявлении специфических антител к различным белкам ВИЧ. Его высокая специфичность по сравнению с другими методами основана на раздельном выявлении антител к различным белкам ВИЧ. Иммуноблот используется для подтверждения положительных результатов скринирования и осуществляется в лаборатории РЦ СПИД. Требуется специально подготовленный персонал и лабораторное оборудование, также тест-система, зарегистрированная в стране. Постановку реакции и учет полученных результатов осуществляют строго в соответствии с тест-системой.

4. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

ПЦР - это высокочувствительная реакция, при которой происходит амплификация (селективное умножение) специфических последовательностей ДНК до такого уровня, когда их можно определить методом электрофореза или другими методами. ПЦР используется для выявления провирусной ДНК ВИЧ в крови (при качественном анализе) или геномной РНК ВИЧ в плазме крови (при количественном анализе, т.е. для определения «вирусной нагрузки»). Требуется специально подготовленный персонал и лабораторное оборудование, а также соответствующие тест-системы, зарегистрированные в стране.

НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

5. Определение количества CD-4-лимфоцитовявляется неспецифическим методом определения состояния иммунного статуса. CD4-лимфоциты представляют собой субпопуляцию Т-лимфоцитов (Т-хелперов), количество которых в норме составляет от 500 до 1500 в 1 мкл крови в зависимости от возраста. Снижение количества Т-хелперов (СД4) является главным прогностическим показателем Т-клеточного иммунодефицита при ВИЧ-инфекции, которое проявляется уже бессимптомной стадии и сохраняется в течение всего заболевания. Определение уровня CD4 лимфоцитов в образцах крови проводят с помощью моноклональных антител на проточном цитофлюориметре. Требуется специально подготовленный персонал и лабораторное оборудование, а также соответствующие тест-системы, зарегистрированные в стране.

Стратегия тестирования в соответствии с рекомендациями ВОЗ, ЮНЭЙДС, CDC(WHO/CDS/CSR/EDC/2001.16, UNAIDS/01.22E)

Стратегия 1 - одно тестирование без подтверждения положительного результата применяется:

· Для тестирования крови доноров;

· Постановке диагноза с распространенностью ВИЧ-инфекции более 30% инфекции среди населения с клиническими симптомами и проявлениями ВИЧ-инфекции;

· Для эпидемиологического слежения в популяциях, с распространенностью ВИЧ-инфекции более 10%.

Стратегия 2 - (одно тестирование с одним подтверждением положительного результата), применяется при:

· Постановке диагноза с распространенностью ВИЧ-инфекции не более 30% инфекции среди населения с клиническими проявлениями или симптомами ВИЧ-инфекции или среди популяции с распространенностью ВИЧ-инфекции более 10% с асимптоматическими проявлениями инфекции;

· Для эпидемиологического слежения в популяциях, с распространенностью ВИЧ-инфекции менее 10%.

Стратегия 3 - (одно тестирование с двумя подтверждениями положительного результата) применяется при:

· Постановке диагноза ВИЧ-инфекции среди популяции с распространенностью ВИЧ-инфекции менее или равно 10% без симптоматических проявлений.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВИЧ-ИНФЕКЦИИ У ВЗРОСЛОГО НАСЕЛЕНИЯ

Стратегия. Используется стратегия 3 (одно тестирование с двумя подтверждением положительного результата):

· Биологический материал для постановки ИФА и иммуноблота:

Цельная кровь, сыворотка крови.

· Методы. Скрининговое (первичное) исследование: ИФА (тест-системы 3 и/или 4 поколения) или быстрые тесты.

· Подтверждающий тест: ИФА (тест- системы 3 и 4 поколения) и Иммуноблот (на заключительном этапе).

Алгоритм тестирования

Забор крови проводится с предъявлением паспорта и указанием в направлении номера, серии паспорта и адреса.

На районном уровне: скрининговое исследование с использованием ИФА проводится на одной лунке или с помощью быстрых тестов. При получении отрицательного результата анализа – выдается отрицательный результат. При положительном результате для последующего подтверждения, данная сыворотка направляется в региональные Центры СПИД.

При получении скрининговых положительных результатов ИФА у доноров, заготовленная кровь уничтожается, а само лицо временно отстраняется от донорства. Для окончательного решения вопроса о пожизненном отстранении от донорства, необходимо произвести комиссионный забор крови на станции или в отделении переливания крови при наличии паспорта; в течение 2 недель результат отправляется для окончательного подтверждения в региональный центр СПИД. При положительном результате – донор отстраняется пожизненно, в случае отрицательного результата, вопрос о донорстве может быть решен при повторной сдаче крови через 6 месяцев.

На региональном уровне: исследование образца проводится тест-системами 3 или 4-го поколения на одной лунке.

При получении положительного результата, образец направляется в РЦ СПИД для последующего подтверждения, кроме образцов от анонимных, лиц без постоянного места жительства, а так же от «ДВ».

При получении отрицательного результата, где на районном уровне первый результат был положительный, выдается окончательный отрицательный результат, кроме донорской крови.

На уровне городского Центра СПИД: при положительном результате анализа, данная сыворотка исследуется повторно на той же тест-системе другой серии, а при возможности на другой тест-системе.

При получении отрицательного результата при условии, что первый результат был положительный, но обследуемый образец крови не относится к донору, выдается окончательный отрицательный результат.

На республиканском уровне проводится исследование образца, который по результатам областного Центра СПИД или городского Центра СПИД признан положительным для окончательного подтверждения тест-системами 3-4-го поколения и/или иммуноблотом. При получении отрицательных результатов анализа – выдается отрицательный результат.

При получении положительных результатов выдается положительный результат.

В случае сомнительного результата необходимо провести повторное полное исследование образца согласно предписанию Республиканского центра СПИД.

1.Тестирование донорской крови

Стратегия. Используется стратегия 1 (одно тестирование без подтверждения положительного результата)

Методы.Скрининговое (первичное) исследование: ИФА (тест-системы 3-4 поколения)

Исследование образца проводится на одной лунке. При получении отрицательного результата анализа – выдается отрицательный результат. При получении положительного результата, кровь донора уничтожается, а сыворотка направляется в РЦ СПИД для последующего подтверждения.

2.Постановка диагноза у детей до 18 месяцев с подозрением на ВИЧ-инфекцию.

Алгоритм тестирования и методы исследования определяются в зависимости от ВИЧ-статуса матери.

Дети, рожденные от ВИЧ-инфицированнных матерей

Дети могут быть ВИЧ-инфицированы внутриутробно, во время родов и при грудном вскармливании. Учитывая, что специфические антитела могут преодолевать плацентарный барьер и сохраняться до 18 месяцев, ИФА и быстрые тесты не могут быть использованы для постановки диагноза.

Дети до 18 месяцев находящиеся на искусственном вскармливании могут рассматриваться как ВИЧ-инфицированные только по результатам двух тестов ПЦР по определению провирусной ДНК.

· Для определения ВИЧ статуса у ребенка, рожденного ВИЧ-инфицированной женщиной, методом ПЦР ДНК ВИЧ не используется пуповинная кровь!

· Положительный результат ПЦР ДНК ВИЧ впервые 48 часов жизни ребенка позволяет предположить внутриутробное заражение ребенка.

· Если в первые 48 часов жизни ребенка обследование методом ПЦР ДНК ВИЧ дает отрицательный результат, а в дальнейшем – положительный, считается, что заражение ребенка произошло во время родов.

· К возрасту 3-х месяцев жизни методом ПЦР ДНК ВИЧ можно определить ВИЧ- статус у всех детей, рожденных ВИЧ-инфицированными матерями и не получающих грудное вскармливание.

· Первое исследование методом ПЦР ДНК ВИЧ следует провести у ребенка в возрасте от одного до двух месяцев. Положительный результат теста ПЦР ДНК ВИЧ означает, что ребенок, с наибольшей вероятностью, инфицирован ВИЧ. Отрицательный результат теста ПЦР ДНК ВИЧ в этом возрасте означает, что, с наибольшей вероятностью, ребенок не инфицирован ВИЧ.

· Второе исследование методом ПЦР ДНК ВИЧ следует провести у ребенка в возрасте 3-4 месяцев. Это ключевое исследование у детей в случаях, когда первый тест ПЦР ДНК ВИЧ был отрицательным. Положительный результат второго теста ПЦР ДНК ВИЧ означает, что ребенок, с наибольшей вероятностью, инфицирован ВИЧ. Отрицательный результат второго теста ПЦР ДНК ВИЧ в этом возрасте означает, что, с наибольшей вероятностью, ребенок не инфицирован ВИЧ.

Однократные положительные и/или отрицательные результаты требуют подтверждения.

· Подтверждение положительного результата теста ПЦР ДНК ВИЧ проводится этим же методом в отдельно взятом образце крови как можно раньше (лучше в течение 5-7 дней после получения первого результата) и, желательно, в той же лаборатории.

· Два положительных результата ПЦР ДНК ВИЧ свидетельствует о том, что ребенок ВИЧ-инфицирован и требует немедленного клинического обследования для выбора оптимальной тактики дальнейшего ведения.

Два отрицательных результата ПЦР ДНК ВИЧ позволяют считать ребенка не инфицированным, при условии отсутствия грудного вскармливания.

Дети до 18 месяцев находящиеся на естественном вскармливании обследуются через 6 и более недель после рождения методом ПЦР по обнаружению ДНК ВИЧ. При положительном результате ПЦР ребенок считается ВИЧ-инфицированным и направляется для решения вопроса о лечение. При получении отрицательного результата ПЦР тест повторяется не ранее, чем через 6 недель после прекращения грудного вскармливания. При положительном результате ребенок считается ВИЧ-инфицированным и направляется на лечение. При отрицательном результате ребенок считается не ВИЧ-инфицированным.

Дети, рожденные от ВИЧ-отрицательных матерей

Методы: ИФА и иммуноблот.

Биологический материал для постановки ИФА и ИБ: цельная кровь, сыворотка крови.

Дети с клиническими показаниями исследуются также как и взрослые, однако при получении первого положительного результата в ИФА дополнительно обследуется образец крови матери. Если образец матери положительный, она обследуется по алгоритму исследования взрослого населения.

При подтверждении ВИЧ-инфекции у матери ребенок тестируется по схеме предусмотренной при вертикальном пути инфицирования ВИЧ.

При отрицательном ВИЧ статусе матери, ребенок тестируется по алгоритму исследования взрослого населения.

Дополнения: учитывая, что иммунная система у ребенка имеет свои возрастные особенности и формирование антител к специфическим белкам ВИЧ может быть неполным при положительных результатах ИФА и отрицательном или сомнительном результатах иммуноблота дополнительным подтверждающим тестом является ПЦР.

Однократные положительные и/или отрицательные результаты требуют подтверждения. Подтверждение положительного результата теста ПЦР ДНК ВИЧ проводится этим же методом в отдельно взятом образце крови как можно раньше (лучше в течение 5-7 дней после получения первого результата) и, желательно, в той же лаборатории.

Требования к забору, регистрации и транспортировке материалов для исследования на ВИЧ

1. Кровь у обследуемого берется натощак, накануне не рекомендуется употребление жирной пищи.

2. Забор кровипроизводится медицинским персоналом в процедурном кабинете лечебно-профилактического учреждения из локтевой вены в чистую сухую центрифужную пробирку в количестве 5 мл. Перед тем как осуществить забор крови, записать данные пациента в своем регистрационном журнале и направление с документа, устанавливающего его личность (паспорт, свидетельство о рождении). Вымыть руки с мылом, надеть перчатки. Маркировать пробирку согласно номеру в регистрационном журнале и направлении. Усадить пациента так, чтобы его нерабочая рука могла свободно лежать на столе, за которым будет осуществляться взятие крови. Надо выбрать наиболее крупную вену и обработать руку тампоном, смоченным 70 % этиловым спиртом. Открываем и готовим одноразовый шприц на глазах пациента, накладываем жгут выше места прокола. Руку обрабатываем спиртовым тампоном, производим прокол, оттягиваем поршень шприца и набираем не менее 5 мл крови. Сброс крови со шприца в пробирку должен производиться медленно по стенке пробирки во избежание гемолиза.

3. Взятая для исследования цельная кровь должна быть доставлена в диагностическую лабораторию в течение 24 часов с момента взятия крови. В случае невозможности доставки образцов крови в установленное время материал пересылается только в виде сыворотки (без сгустков) в течение 5 дней с момента взятия крови при условии ее хранения до отправки в диагностическую лабораторию СПИД при температуре плюс 4-8⁰С. Количество доставляемой сыворотки должно быть не менее 1,0 мл.

Сыворотка отделяется от сгустка крови центрифугированием. Отделенная сыворотка переносится в сухую, чистую пробирку при помощи дозатора с одноразовым наконечником, маркируется и хранится до 5 дней при температуре 4 - 8⁰С.

Во избежание контаминации образцов, запрещается использовать палочки (стеклянные, металлические и т.п.), для обводки забранной крови в пробирке.

4. Доставка образцов крови осуществляется специальным транспортом, специально выделенным для этой цели подготовленным медицинским персоналом учреждения, в специальной одежде (халат, шапочка или косынка). Запрещается посылать материал через водителя или другое немедицинское лицо.

5. Доставка материала в общественном транспорте категорически запрещается.

6. Пробирки с образцами в центрифужных пробирках устанавливаются в штативы. На каждой пробирке карандашом по стеклу проставляется порядковый номер. Количество пробирок и их нумерация должны строго соответствовать списочному составу в направлениях. Для герметизации пробирок не допускается использование ватно-марлевых тампонов. Запрещается обворачивать пробирки направлением. Образцы доставляются в сумке-холодильнике, биксе, металлическом контейнере с соблюдением холодового режима.

Направления заполняются в 2-х экземплярах по утвержденной форме (ф-506/у). Направления вкладываются в отдельный пакет, затем помещаются в бикс с образцами.

Лечебно-профилактические учреждения, второй экземпляр направлений с результатами ИФА, иммуноблота обязаны забирать своевременно в течении 5 дней.

При доставке первично-серопозитвных в ИФА сывороток для контрольного исследования необходимо представить отдельное направление (ф-509/у) в 2-х экземплярах с указанием всех паспортных данных, включая дату обследования, серию, тип диагностикума, результаты проведенных анализов. В направлении обязательно необходимо ставить пометку «первично», «повторно», «диспансерный». На одноразовых герметично закрытых пробирках, в которых доставляется сыворотка, наряду с номером пробирки должна обязательно писаться фамилия исследуемого.

В лаборатории поступившим образцам должны обязательно присваиваться лабораторные регистрационные номера и для подготовки к постановке рабочие номера. Поступившая сыворотка должна храниться до полного завершения исследований и выдачи окончательного результата.

Поступаемые сыворотки должны быть без гемолиза, бактериального пророста, хилёза. При наличии вышеуказанных нарушений сыворотка бракируется и заносится в бракеражный журнал (ф-250 /у).

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА)

Контроль качества – это совокупность методов и действий, которые используются для выполнения требований по обеспечению качества.

На все этапы лабораторного процесса (преаналитический, аналитический, постаналитический) в лаборатории должны быть разработаны и утверждены стандартные операционные процедуры (СОП- форма №1).

Качество проводимого ИФА в диагностических лабораториях зависит от очень многих факторов: качества тест-систем, условия их хранения, температурного режима помещений, спектрофотометра, термостата, точности работы автоматических пипеток, квалификации сотрудников лаборатории. Температура воздуха в лаборатории должна быть в пределах 18-21 градусов т.к. колебания температуры влияют на результаты анализов. Необходимо своевременно проводить ежегодную метрологическую поверку аппаратуры и оборудования (Госстандартизация). Ежедневно вести контроль и запись температурного режима в холодильниках, морозильниках и термостатах.

Тест-системы необходимо хранить в холодильниках при температуре плюс 4-8⁰ С.

Для того чтобы убедиться в достоверности результатов анализа в процессе постановки необходимо проводить контроль. Различают внутренний и внешний контроль качества.

Внешний контроль качества 2 раза в году проводит Референс-лаборатория Министерства Здравоохранения совместно со специалистами РЦ СПИД.

При постановке ИФА, помимо контролей указанных в инструкции дополнительно ставится внутренний контроль – «положительная» сыворотка, закупленная в референс-лаборатории или приготовленная самой лабораторией.

Для проведения внутреннего контроля необходимо приготовить проверенные ИФА-положительные сыворотоки от ВИЧ-инфицированных лиц. Необходимо, чтобы оптическая плотность (ОП) ВИЧ «положительных» сывороток тест-системы, была примерно в 1,5 разе выше оптической плотности сыворотки.

Далее методом ИФА определяется оптический показатель сыворотки, затем отбираются сыворотки с оптическим показателем в 1,5 раза выше ОП критической. В дальнейшем «положительная» сыворотка будет использоваться как контрольный образец. Приготовленные образцы в объеме 200-300 мкл замораживаются в одноразовых пробирках. Для использования, перед постановкой сыворотки размораживают и доводят до температуры 18-20º С.

Проведение первичных скрининговых исследований на антитела к ВИЧ.

Первичные скрининговые исследования на выявление антител к ВИЧ ИФА методом осуществляются районными, межрайонными, областными, научно исследовательскими институтами, Ташкентским городским и Республиканским диагностическими лабораториями СПИД. Исследуются сыворотки, первично взятые от различных контингентов, подлежащих обследованию на антитела к ВИЧ в соответствии с СанПиН № 0187 2005 г скрининговые ИФА исследования проводятся в несколько этапов.

Проведение исследований сывороток можно осуществлять с применением нескольких стрипов из тест-систем во избежание накопления и задержки выдачи ответов.

При каждой постановке ИФА, не зависимо от количества использованных стрипов необходимо проставлять контроли в строго определенном количестве, указанном в инструкции тест системы.

1 этап. Каждый образец сыворотки исследуется в одной лунке. Категорически запрещается исследовать в одной лунке сыворотки от 2-х и более лиц. При получении отрицательного результата при первичной постановке, сыворотка расценивается как отрицательная и исследование прекращается. Если результат ИФА будет положительным, данная сыворотка тестируется по 2 этапу.

2 этап. Исследования проводятся повторно при наличии другой тест-системы или на той же тест-системе на 2-х лунках. При получении положительного результата производится комиссионное (с участием эпидемиолога, лаборатории, инфекциониста) повторное взятие 2-го образца крови с паспортными данными у этого лица. Данная сыворотка исследуется повторно в ИФА. При получении положительного результата в районных, межрайонных лабораториях сыворотка второго забора в количестве не менее 1,5 мл переливается в одноразовые полистероловые пробирки с герметично закрывающейся крышкой и направляются для подтверждения в лаборатории Каракалпакского, областных и городского Центров СПИД. При получении положительного результата в направлениях необходимо указать «исследования продолжаются».

3 этап. В лабораториях Республики Каракалпакстан, областных и городского Центров СПИД поступившие сыворотки тестируются на тест-системах 3-4 поколения российского или зарубежного производства на 2-х лунках. Позитивные сыворотки, кроме анонимных, которые подтверждены в лабораториях Каракалпакского, областных и городского Центров СПИД, направляются для подтверждения в РЦ СПИД.

Подтверждающие исследования, проводимые в лаборатории РЦ СПИД.

Диагностическая лаборатория РЦ СПИД является референсной, арбитражной лабораторией, а также организационно-методическим центром.

Данная лаборатория контролирует качество работы всех диагностических лабораторий СПИД республики.

В диагностическую лабораторию РЦ СПИД поступают на подтверждение все первично-позитивные в ИФА сыворотки, выявленные в региональных диагностических лабораториях СПИД республики. Сыворотки считаются ИФА положительными только после подтверждения в лаборатории Республиканского Центра СПИД.

1 этап. Поступившие на подтверждение сыворотки исследуются на тест-системах 3-4-го поколения российского или зарубежного производства в одной лунке. При получении отрицательного результата окончательный результат считается отрицательным. При получении положительного результата эти сыворотки регистрируются в журнале (ф-501/у) и исследуются методом иммуноблота. В некоторых случаях при получении неопределенного результата в ИФА или на основании эпидемиологических и клинических данных необходимо проводить 2-й этап исследований.

2 этап. Анализы проводятся на другой или на той же тест-системе в 2-х лунках. На основании данных, полученных на 2-х тест-системах, результат оценивается как положительный или отрицательный.

МЕТОД ИММУНОБЛОТА

ВИЧ имеет сложный антигенный состав. Всего в его составе имеются 9 структурных белков (антигенов), которые подразделяются на 3 группы: оболочечные, сердцевинные и ферментные:

ГРУППА БЕЛКОВ	ВИЧ-1	ВИЧ-2
Белки оболочки вируса	gр.41, 120, 160	gр.36, 105, 140
Белки сердцевинные	Р.17, 24, 55	Р.18, 26, 56
Ферменты вируса	Р.31, 51, 66	Р.68

ПРИМЕЧАНИЕ: цифры-молекулярный вес белков в килодальтонах, р-протеин, др.-гликопротеид.

Принцип метода основан на том, что вирус разрушают с помощью детергентов, и он распадается на отдельные антигены. Затем антиген прогоняют электрическим током через молекулярное сито в полиакриламидном геле. При этом белки с низким молекулярным весом двигаются быстрее, а крупные белки с трудом проходят сквозь сито и двигаются медленнее. Затем белки переносятся на нитроцеллюлозную мембрану и разрезаются на полоски (стрипы).

В зависимости от молекулярного веса каждый антиген занимает на полоске определенное место в соответствии с его молекулярным весом.

Антитела, содержащиеся в сыворотке, реагируют с соответствующим антигеном и прикрепляются к нему. Для выявления комплекса антиген-антитело,

как и в ИФА, используется конъюгат и окрашивающийся субстрат. Там, где произошло образование комплекса антиген-антитело-конъюгат, происходит окрашивание участков нитроцеллюлозы в виде полос, соответствующих расположению антигена.

Как было указано выше вирус имеет следующие антигены, которые располагаются на стрипе в последовательности, соответствующей их молекулярному весу: gр.160,120, р.66,55,51, gр.41, р.24,18.

В соответствии с рекомендациями экспертов ВОЗ результаты, полученные в иммуноблоте, интерпретируются как положительные, сомнительные или отрицательные по следующей схеме:

Положительные: обнаружены антитела не менее чем к 2-м оболочечным белкам из 3-х (gр.160.120,41).

Сомнительные (неопределенные): обнаружены антитела к одному или нескольким вирусным белкам, но не выявляются антитела к 2-м оболочечным белкам.

Отрицательные: не содержат антитела ни к одному из белков вируса.

В случае положительного результата – подтверждается диагноз ВИЧ-инфекции.

В случае сомнительного результата необходимо провести повторное исследование через три месяца и при сохранении таких же результатов – еще через три месяца. При получении сомнительного двукратного результата образец сыворотки исследуется методом ПЦР.

Отрицательный результат ПЦР свидетельствует об отсутствии антител к ВИЧ.

Определение количества CD4-лимфоцитов.

Для уточнения степени и характера иммунодефицита используют методы оценки иммунного статуса. К ним можно отнести:

- Определение абсолютного и относительного количества лейкоцитов и лимфоцитов в периферической крови.

- Определение абсолютного и относительного количества субпопуляций Т-лимфоцитов СД4 (Т-хелперов). Определение концентрации молекул СД4 на поверхности Т-хелперов.

- Определение СД8 Т супрессоров/киллеров и соотношение СД4/СД8.

- Определение гуморального иммунитета (содержание иммуноглобулинов М, G , А, Е).

Снижение количества лимфоцитов проявляется с бессимптомной стадии и длится в течение всей болезни. Лимфопения, нейтропения повышают чувствительность к ВИЧ-инфекции и являются прогностически неблагоприятными признаками. Снижение количества Т-хелперов (СД4) является главным прогностическим показателем Т-клеточного иммунодефицита при ВИЧ-инфекции.

Измерение уровня CD4-лимфоцитов позволяет судить о глубине развившегося у больного иммунодефицита. Уровень снижения количества CD4

клеток может служить критерием для определения вероятности возникновения тех или иных вторичных заболеваний.

Определение уровня CD4 лимфоцитов проводят с помощью моноклональных антител на проточном цитофлюориметре. В норме количество Т-хелперов колеблется от 500 до 1500 в 1 мкл.

Снижение абсолютного количества их до 350 и ниже говорит о прогрессировании ВИЧ-инфекции и развитии СПИДа.

Определение количества СД8 Т-супрессоров проводится аналогично определению СД4 Т-хелперов. Увеличение количества СД8 отмечается на ранней стадии ВИЧ-инфекции. Соотношение СД4/СД8 соответстсвует 1,5-2.

Забор крови для СД4 производит специально обученный медицинский персонал со средним образованием, с регистрацией данных в журнале (ф-515/у). Забор осуществляется натощак из локтевой вены в специальные пробирки вайкутейнеры с ЭДТА (с сиреневыми крышками) в количестве 5 мл. После сбора крови пробирки необходимо осторожно переворачивать от 5 до 10 раз для предотвращения свертывания крови. Сильно не перемешивать. Пробирки с кровью до отправки в лабораторию хранят при комнатной температуре не более 6 часов и далее при 2-8⁰ С не более 24 часов. Пробирки с кровью должны быть доставлены в лабораторию в день забора в штативах помещенных в сумки холодильники.

В лабораториях кровь исследуется согласно применяемой методике на СД4.

Иммунологический маркер	Пороговые значения CD4, при которых рекомендуется начинать АРТ
	£11 месяцев	12- 35 месяцев	36— 59 месяцев	³5 лета
Доля лимфоцитов CD4 и/или число лимфоцитов CD4	£ 25% (£1500/мкл)	£20% (£750/мкл)	£15% (£350/мкл)	£200/мкл (£15%)
а С пятилетнего возраста более точным показанием для начала АРТ служит число лимфоцитов CD4. Источник: адаптировано из рекомендаций ВОЗ, 2006 (30).

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это высокоэффективная реакция, при которой происходит амплификация (селективное умножение) специфических последовательностей ДНК до такого уровня, когда их можно определить методом электрофореза или другими методами.

ПЦР используемая на практике для ранней диагностики ВИЧ позволяет определить провирусную ДНК, геномную РНК вируса.

Выявление ВИЧ и его антигенов необходимо для ранней диагностики перинатального заражения у детей первых лет жизни, т.к. материнские антитела класса G проникают через плаценту.

У взрослых эти исследования необходимо проводить в серонегативном периоде, при неопределенных результатах иммуноблота и для контроля эффективности проводимого лечения.

Диагностика ВИЧ-инфекции у детей до года и старше, родившихся от ВИЧ-инфицированных матерей, представляет определенные трудности. Это обусловлено тем, что как уже упоминалось, в крови новорожденных (иногда до 12-15 месяцев) циркулируют материнские антитела класса G и у детей первого года жизни нет репликации ВИЧ. В таких случаях ни вирус, ни его геном не выявляются. В этом периоде можно обнаружить лишь р24.

Принцип диагностики ВИЧ-инфекции у детей до года следующий:

С помощью ПЦР выявляют ВИЧ. Независимо от результатов такого исследования (положительный или отрицательный) его повторяют через 2-4 месяца и определяют р24. При положительном результате ВИЧ-инфекция подтверждается, при отрицательном (отсустсвие р24) – нет ВИЧ-инфекции. У детей старше года вначале определяют антитела методом ИФА. При отрицательном результате – инфекция исключается, при положительном – проводится подтверждение в иммуноблоте. В случае положительного результата иммуноблота диагноз ВИЧ-инфекции подтверждается, при отрицательном результате этот диагноз исключается.

Недостаток метода – необходимость дорогостоящего оборудования и достаточно высокая стоимость расходных материалов.

Для исследования используется венозная кровь в количестве 3-5 мл. Кровь забирается стерильным способом в специальные пробирки (вакутайнеры с ЭДТА). После взятия кровь аккуратно смешивается с антикоагулянтом путем переворачивания пробирки 8-10 раз. Хранение и транспортировка образцов проводится при температуре 2 – 8 градусов С. Исследование желательно проводить не позже 48 часов от момента забора крови. Следует помнить, что гепарин угнетает ПЦР. Транспортировка образцов крови проводится в сумках-холодильниках или контейнерах с соблюдением холодового режима.

Определение количественного показателя присутствия ВИЧ.

Концентрация РНК ВИЧ в крови, так называемая “вирусная нагрузка”, в настоящее время считается одним из основных лабораторных маркеров прогрессирования ВИЧ-инфекции.

Под «вирусной нагрузкой» подразумевают количество РНК- копий вируса в 1 мл крови.

Повышение вирусемии является наиболее ранним признаком начинающегося прогрессирования заболевания и неблагоприятным прогностическим симптомом. Концентрация РНК ВИЧ измеряется в количестве копий РНК ВИЧ в миллилитре крови. Иногда этот показатель измеряется в десятичных логарифмах (log10). «Вирусная нагрузка» от 500 до 10000-30000 копий в 1 мл крови соответствует ВИЧ-инфицированности, от 30000 до 100000 копий в 1мл крови соответствует ВИЧ ассоциированному комплексу, более 100000 копий в 1 мл- СПИД.

Поскольку в каждом вирусе иммунодефицита человека содержатся две копии РНК количество вирусных частиц в крови в два раза меньше чем показатель “вирусной нагрузки”. Показатель “вирусной нагрузки” используется для определения показаний к началу антиретровирусной терапии и быстрой оценки ее эффективности. «Вирусная нагрузка» более 60000 копий РНК ВИЧ в миллилитре крови является показанием к началу антиретровирусной терапии. Значимым изменением концентрации РНК ВИЧ считается разница в показателе, по сравнению с предшествующим уровнем, не менее чем в 3 раза. При эффективной антиретровирусной терапии уже к 4-8 неделе отмечается снижение уровня РНК ВИЧ в 3-5 раз. К 12-16 неделе лечения у большинства пациентов уровень РНК ВИЧ становится неопределяемым.

Острые инфекционные заболевания (не обязательно связанные с ВИЧ-инфекцией) и вакцинация могут временно повышать уровень вирусной нагрузки. Поэтому результаты исследования, проведенные в течение 4 недель после таких

эпизодов, не могут рассматриваться как критерии к назначению терапии. В этих случаях показано повторное обследование.

ТРЕБОВАНИЯ К РАЗМЕЩЕНИЮ ЛАБОРАТОРИЙ.

Выделение помещений под лабораторию или реконструкция существующих помещений проводится по согласованию с режимной комиссией (городской или областной). После проведения подготовительных работ требуется получение разрешения Центральной режимной комиссии Минздрава РУз на работу с возбудителями инфекций 3-4 группы патогенности. Необходимо предусмотреть поточность движения патогенного материала.

Лаборатория должна располагаться в отдельном здании, этаже или изолированном помещении учреждения с отдельным входом, должна иметь незаразное и заразное отделения.

В незаразном отделении должны быть помещения для верхней одежды, приема пищи, для отдыха сотрудников, лаборантская, врачебная комната, склад для хранения инвентаря, дезинфицирующих средств, туалетная и душевая.

В заразном отделении необходимо иметь комнату для приема и регистрации поступившего на исследование материала, комнату для разборки и подготовки сывороток к серологическим исследованиям, серологическую, комнату для обеззараживания обработанного материала, моечную, стерилизационную.

ПРАВИЛА РАБОТЫ В ЛАБОРАТОРИИ, ОБЕСПЕЧЕНИЕ ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКОГО РЕЖИМА

Диагностическая лаборатория СПИД осуществляет определение антител к ВИЧ методом ИФА в сыворотке крови согласно с СанПиН № 0187 2005 г «О проведении медицинского обследования на ВИЧ/СПИД».

Работа в лаборатории осуществляется в соответствии с правилами противоэпидемического режима работы с возбудителями 3-группы патогенности. При поступлении на работу необходимо пройти инструктаж по соблюдению санитарно-гигиенического и противоэпидемического режима.

Подобные инструктажи должны проводиться для всех сотрудников лаборатории не реже, чем 2 раза в год.

Врачи диагностических лабораторий СПИД должны проходить усовершенствование в ИУВ 1 раз в 5 лет, первичную специализацию на рабочем месте в РЦ СПИД, а заведующие областных центров СПИД 1 раз в 3 года. Лаборанты – проходят усовершенствование в Центрах по усовершенствованию среднего медицинского работника 1 раз в 5 лет и первичную специализацию на рабочем месте в РЦ СПИД. В дальнейшем каждые 3 года лаборанты проходят усовершенствование в областных Центрах СПИД.

Работа в заразном отделении лаборатории проводится в противочумном костюме 3-типа (хирургический халат, шапочки или косынка, резиновые

перчатки, носки, тапочки). Необходимо надевать маски или пользоваться защитными экранами. Перед работой все повреждения на коже должны быть закрыты лейкопластырем или напальчниками. Перед каждым надеванием перчаток нужно проверять их целость, для чего их нужно наполнить воздухом и посмотреть, нет ли утечки воздуха.

Прежде чем приступать, к работе необходимо приготовить, дезинфицирующие растворы и подготовить рабочие места к приему материала и проведению анализов.

При работе с тестируемыми образцами следует обращаться как с потенциально инфекционным материалом.

Работа с присланным на исследование материалом проводится в перчатках с соблюдением мер предосторожности. После приема материала направления образцов помещают в термостат на 60-80^оС для обеззараживания. Образцы крови (сыворотки) перекладывают в штативы диагностической лаборатории, помещенные на подносы, и переносят в комнату для разборки и подготовки материала. Контейнеры, в которых доставлен материал и штативы, обрабатываются дезинфицирующим раствором. Поступивший для исследования материал регистрируется в журнале.

По завершении анализов производится дезинфекция рабочих столов и других предметов, используемых в работе, производится обеззараживание обработанного материала.

Перчатки перед снятием протирают тампоном с 70º спиртом или 6% раствором перекиси водорода, затем моют теплой водой с мылом. Снятые перчатки погружают в сосуд с дезинфицирующим раствором и придавливают грузом, руки протирают тампоном, смоченным 70º спиртом, и моют теплой водой с мылом. Для вытирания обработанных перчаток и рук должны быть отдельные полотенца. С целью обеспечения безопасности медперсонала лаборатории, работающих в боксе, сотрудникам необходимо использовать одноразовые резиновые перчатки.

Во время перерыва в работе в связи с производственной необходимостью или по экстренным причинам также дезинфицируются рабочие столы, обрабатываются перчатки и руки.

Использованные пробирки с образцами, пипетки и другие помещают в емкости (эксикатор, эмалированное ведро, кастрюля) заливаем 3% раствором хлорамина или 3% раствором осветленной хлорной извести или 6% раствором перекиси. Время экспозиции не менее 6 часов при закрытой крышке. Поверхности аппаратов протираются 96º этиловым спиртом.

В конце рабочего дня проводится влажная уборка всего помещения лаборатории с применением дезинфицирующих средств (моют полы, протирают стены, двери, потолки, подоконники, окна, шкафы и т.д.). После уборки рабочие комнаты облучают бактерицидными лампами в течение 60 минут. Мощность облучения должна составлять не менее 2,5 вт.куб.м.

Термостаты, холодильники, шкафы или двери рабочей комнаты, где они находятся, запираются или пломбируются.

Запрещается в заразном отделении принимать пищу, курить, вносить и хранить посторонние вещи (сумки, верхнюю одежду) и т.д.

В помещениях лаборатории (заразном и незаразном) не менее 2 раз в день проводится влажная уборка с применением дезинфицирующих средств.

После ухода сотрудников лаборатория закрывается на замок и опечатывается ответственным лицом или дежурным.

В лаборатории должны находиться укомплектованные аптечки и необходимые средства на случай экстренной помощи при аварийной ситуации:

- Резиновые перчатки 3 пары

- Напальчник 4 шт.

- Ножницы 1 шт.

- Перманганат калия в навесках 0.1, 3 навески, емкость для разведения перманганата калия с маркировкой 1 литр.

- Этиловый спирт 70% 100 мл.

- Настойка йода 5% 30 мл.

- Раствор перекиси водорода 6% - 0,5 л

- Маски 4 слойные 3 шт.

- Мешок пластиковый большой емкости для сбора загрязненной одежды 1 шт.

- Дез. средства: хлорамин 30 гр каждый или разрешенные для применения другие средства.

- Емкость для разведения дез. средств 1 шт.

- Раствор проторгола 1% 1 флакон

- Раствор альбуцида 30% 1 флакон

- Борная кислота 1% 100 мл

ПРАВИЛА ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ В ЛАБОРАТОРИИ.

1. Лаборатория должна быть обеспечена водопроводом, канализацией, электричеством, боксами с приточно-вытяжной вентиляцией, центральным отоплением, горячим водоснабжением, газифицирована.

2. Все помещения лаборатории должны иметь естественное и искусственное освещение, отвечающие строительным нормам и правилам. Температура воздуха в лаборатории должна быть в пределах 18-21 градусов т.к. колебания температуры влияют на результаты анализов. В летнее время в постановочной комнате должен функционировать кондиционер.

3. В помещении лаборатории нельзя хранить реактивы и диагностикумы без обозначений, пробовать на вкус и вдыхать неизвестные вещества; хранить запасы ядовитых, сильнодействующих, взрывоопасных веществ и растворов на рабочих столах и стеллажах.

4. Для каждого вида аппаратов, оборудования должна быть инструкция по их эксплуатации, вывешенная на рабочем месте.

5. При эксплуатации автоклавов должны соблюдаться следующие требования:

· работающий с автоклавом должен иметь удостоверение, дающее право для работы с автоклавом.

· при открывании крышки автоклава защищать руки для предупреждения ожогов.

· обеззараживать в конце рабочего дня помещение автоклавной путем обработки пола и стен дезинфицирующим раствором.

· вести журнал контроля работы автоклава (ф-508/у).

· работа с концентрированными кислотами и щелочами должна производиться в резиновых перчатках и предохранительных очках.

Требования к тест-системам, используемым в диагностической СПИД лаборатории:

1. Все тест-системы, которые применяются в диагностической лаборатории СПИД, должны иметь разрешение фармакологического комитета МЗРУз.

2. Каждая партия должна проходить проверку в Референс лаборатории МЗ РУз.

3. Инструкции должны быть на государственном и на русском языках.

4. При транспортировке необходимо соблюдать температурный режим.

5. При закупке тест-системы должны иметь сертификаты от официальных дистрибьюторов производителя с указанием срока годности.

Форма бракеражного журнала.

№ п/п	Дата и время доставки образца	Откуда поступил материал	Количество поступивших образцов	Количество отбракованных образцов	Причина брака	Ф.И.О. доставившего образцы	Ф.И.О (комиссии) лабораторного сотрудника	Проведенные мероприятия по бракеражу

ИММУНОБЛОТГА ТЕКШИРИШ ПРОТОКОЛИ №__________

«______» ___________________200 _____й.

Направление на исследование образцов крови в ИФА на ВИЧ

№ п.п.	Наименование лаборатории	Ф.И.О.	Пол	Дата рождения	Дом.адрес	Место работы	Код	Результат исследования	Подпись

ЖУРНАЛ

«обеззараживания инфицированных материалов»

Журнал регистрации материала, поступающего на выявление ВИЧ

ЖУРНАЛ

регистрациирезультатов обследованных больных на СД-4